凝膠過濾填料的特點和選用要點來看看

　　凝膠過濾或尺寸排阻是一種簡單、的層析方法，用于蛋白或生物大分子的純化。

　　凝膠過濾填料是由葡聚糖苷和3-氯-1，2環(huán)氧丙烷以醚鍵相互鉸鏈而成，不同型號的葡聚糖凝膠用英文字母G表示，如G-25，G-75等，G后面的數(shù)字為凝膠吸水量再乘以10。sephacryl：為葡聚糖偶聯(lián)丙烯基，再和甲叉雙丙烯酰胺聚合而成的介質(zhì)。它有較高的硬度，能承受比普通凝膠更大的靜水壓力，由于屬于部分大網(wǎng)孔型凝膠，可用于分離蛋白質(zhì)、核酸、多糖和蛋白聚糖甚是病毒顆粒。

　　凝膠過濾填料特點：

　　1、適合用有機溶劑分離嗜脂性分子，可以非常經(jīng)濟地大規(guī)模制備各種天然產(chǎn)物

　　2、結(jié)合凝膠過濾、分配色譜及吸附性層析于一身，分離結(jié)構(gòu)非常相近的分子

　　3、載量可高達300mg樣品/ml凝膠，極少需要再生，分離效果可保持十幾年不變。

　　作為凝膠柱層析中的關(guān)鍵一環(huán)，選擇合適的填料是關(guān)重要的，下面我們來了解下。

　　1.當目標蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚時，可用PAGE電泳方法或?qū)游龇椒右詼y定。分離范圍廣闊的Superose HR預(yù)裝柱很適合測定未知蛋白的分子量。用少量離子交換介質(zhì)在多個含不同PH緩沖液的試管中，可簡易地測出PI，并選擇純化用緩沖液的佳PH。

　　2.若對目標蛋白的特性或樣品成分不太了解，可嘗試幾種不同的純化方法：

　　(1)使用通用的凝膠過濾方法，選擇分離范圍廣闊的介質(zhì)如Superose、Sephacryl HR依據(jù)分子量將 樣品分成不同組份。

　　(2)用含專一配體或抗體的親和層析介質(zhì)結(jié)合目標蛋白。亦可用各種活化偶聯(lián)介質(zhì)偶聯(lián)目標蛋白的底物、受體等自制親和介質(zhì)，再用以結(jié)合目標蛋白。一步即可得到高純度樣品。

　　(3)體積大的樣品，往往使用離子交換層析加以濃縮及粗純化。高鹽洗脫的樣品，可再用疏水層析純化。疏水層析利用高鹽吸附、低鹽洗脫的原理，洗脫樣品又可直接上離子交換等吸附性層析。兩種方法常被交替使用于純化流程中。